卵子冻起来有何用 详解卵子冰冻及受孕过程
昨日，有杂志官微发文称，演员徐静蕾接受采访时谈起冷冻卵子的话题，她认为冷冻起自己的卵子，就像找到了“世界上唯一的后悔药”，唯一遗憾的是找到这味药有点晚。冷冻卵子到底是一项什么样的技术，适合哪些人群？
“卵 子冷冻技术，目前已经发展到比较成熟的阶段，但这不是要推广该项技术应用的关键。关键在于肿瘤化疗病人进行化疗后对卵巢功能的损害极大，这批年轻的女性癌 症患者尤其需要保留好生育功能。”广州医科大学附属第三医院生殖医学中心主任刘见桥正计划在一些肿瘤学科年会上，重点谈谈如何保护适龄女性癌症患者的生育 功能。“癌症发病率呈上升趋势的同时，患者生存期越来越长，得为她们的生育权考虑。”
30岁乳腺癌患者被建议冷冻卵子
年 仅30岁的林敏(化名)，这两个月的生活糟糕透顶，一个乳房小包块被确诊早期乳腺癌。最先考虑到林敏应该进行生殖细胞冷冻储存的，是广医三院乳腺外科主任 苏榕。“以往类似的病人，外科医生或肿瘤科医生往往更多的是考虑如何处理癌细胞和制定诊疗计划，但这次我决定请生殖医学中心的专家前来会诊。”
苏 榕表示，这样考虑主要基于两个原因，一是林敏的恶性肿瘤发现较早，相关的雌性激素检查和生化检查表明治疗手段可以多样化。“类似情况，她5年生存期最保守 估计也将超过80%以上，乐观点估计，可以长期无瘤生存状态。这就有个问题，治好肿瘤后她将来的生活、家庭组建，医生们是否要考虑？”
二是苏榕知道，随后即将开展的化疗，必然绕不开一种经典的细胞毒素类药物--环磷酰胺，其对正常细胞损害就较大，对生殖细胞的损害更加突出。
苏 榕和刘见桥详尽沟通和会诊后，将处置意见告诉林敏及其家属。无独有偶的是，一名外院淋巴肿瘤专家也遇到类似情况，打电话来咨询年轻女性淋巴瘤患者化疗前冷 冻卵子的问题。苏榕和刘见桥很快给出积极回应。目前，林敏和外院的那位女患者都在进行相关的B超、血液生化检查，等待卵子冷冻操作。
化疗药物能治癌更能杀伤生殖细胞
原本一直专注本专业领域的外科医生和生殖医学医生，从这两个案例中发现了问题的严重性。
“为 什么我们鼓励男性癌症患者在化疗前进行精子冷冻，却忽略了女性患者的同类需求？”这成了刘见桥渴望解答的一个问题。“我们可以说早期的卵子冷冻技术很不成 熟，实际成功率极低。但现在卵子冷冻技术已经基本成熟，成功率大大提高，真的需要考虑女患者，尤其是年轻女患者的生殖细胞冷冻问题。”
他专门翻阅了大量的医学期刊和杂志，并在权威的国际《临床产科与妇科杂志》中找到对该人群推广冷冻卵子的理论依据。在比较了众多国内外知名作者的研究后发现，哪怕是最经典的化疗手段，对年轻女患者的生殖细胞损害也非常巨大。
以乳腺癌为例，小于35岁以下的经典化疗方案中，卵巢早衰发生率为28%-68%。44岁以下组的同类化疗方案，早衰率则达到50%。“卵巢早衰或衰竭，意味着女性无法正常生成卵子，也就是彻底丧失了生育能力。”
刘见桥比较了9位乳腺癌专家采用的7种化疗方案，结论显示，对年轻女性卵巢的损害率最低为13%，最高为68%，绝大多数方案的早衰率超过30%以上。“也就是说，30%以上年轻乳腺癌患者，即便治好恶性肿瘤，却患上不孕不育。”
同 样的情况在另一类恶性肿瘤--白血病化疗当中同样存在。除小于25岁年龄组的卵巢早衰发生率为0以外，其他45岁以下年龄组的年轻女性，早衰率最低 32%，最高为95%。一旦采用化疗合并骨髓移植的白血病年轻女性，其早衰几率基本超过80%，一个19人的30岁年龄组样本调查显示，该群体100%发 生卵巢早衰甚至完全衰竭。
刘见桥表示，在目前恶性肿瘤发病呈现上升趋势、年轻化趋势的情况下，一些没有婚育过的年轻女性，或者符合政策还可以生育二孩的女性，应重点关注肿瘤治疗后的生育能力问题，因为经过化疗后最受影响的就是生殖能力。
难点
怎么给人体最大细胞“脱水”？
冷冻精子的技术很成熟，应用也较广泛。而冷冻卵子在我国的推广难点，除了政策上不支持普通人操作外，关键还是技术层面的问题，也就是近几年才解决的快速冷冻、解冻成功率问题。
广州医科大学第三附属医院生殖助孕中心负责卵子冷冻计划的杜红姿主任表示，卵子作为人体最大的体细胞，构成卵子细胞的主要成分中，除了各类生命物质，最主要的就是水，它们在冷冻卵子的过程中，成了最需要克服的瓶颈。
“卵子细胞内的水分过多，冷冻过程中，水由液体变成固体的过程中，会形成棱角分明的冰晶。这些细微的棱角，极可能成为破坏卵子细胞中物质的元凶。”杜红姿表示，细胞里的水分过少也不行，失去水分的支持，虽然便于保存，但细胞就会完全死掉。
冷 冻卵子的技术由来已久，最早是为了满足畜牧业对珍稀动物的保护和配种用途，上世纪60-70年代开始研究。但它真正第一次应用于人工辅助生殖技术，也就是 1986年的事情。当时澳大利亚专家第一次复苏了冷冻卵子，并成功形成胚胎、受孕，最后诞生了第一个被称为“冰宝宝”(又被称为“时光婴儿”)的通过冰冻 卵子孕育的试管婴儿。但当时的专家发现，冻卵的复苏率很低，做试管婴儿时的成功率也远低于新鲜卵子。直到发明了快速脱水和极速冷冻方法，这个问题才得到有 效解决。
冷冻：用试剂控制脱水过程 1秒钟降到零下196℃
中学生物课都做过这样的实验：将一株植物放置在浓度很高的盐水中，植物会慢慢枯萎。盐水和植物自身水分之间存在的渗透压，会让植物水分突破细胞壁，向外环境逃逸。
动 物细胞虽然只有细胞膜，但也存在类似的渗透压。正是基于这样的原理，生殖医生可以对卵子进行脱水冷冻。先将其放置到细胞培养液和专业器皿中30分钟左右， 随后一种15毫升装、售价2800元的脱水试剂“上场”。这种试剂主要是乙二醇、二甲基亚砜类物质，已被证实在脱水过程中对卵子细胞的安全危害性极小。
先用浓度低、渗透压低的试剂，卵子细胞开始快速脱水；再上浓度高、渗透压力高的试剂，让脱水过程可控，保留一定水分。随后，在1秒钟内让脱水后的卵子由室温降低到零下196℃。细胞内的液体不再是冰晶，而是玻璃化的固态物质，对卵子细胞的损害也就降到了较低水平。
复活：给卵细胞“注水”在模拟人体环境待4小时
而 让冷冻卵子快速复活的过程，则是将上述昂贵试剂的浓度由高向低进行反向操作。为保证水分缓慢进入解冻后的卵细胞，高渗透压、高浓度的解冻试剂先上，让外部 环境的洁净水分、培养液慢慢进入卵细胞中。接着上浓度稍低的试剂，又渗透进一些水分、培养液；当第四组渗透压和浓度均为最低的试剂“上场”时，给卵细胞 “注水”的过程也就完成了。
随后，生殖医学专家还会将这些复苏的卵子，放置在37℃、二氧化碳浓度6%、湿度95%以上的培养液中待上4个 小时。在模拟出来的人体环境待上足够长时间后，感觉回到熟悉环境的卵子细胞才终于“满血复活”。之后，能否成功与精子完成结合，分娩出试管婴儿，就要看胚 胎质量、生殖系统状况等因素了。
释疑
癌症患者什么时候冷冻卵子？
术后1个月内“不主张为冻卵延后化疗”
癌症患者如决定进行卵子冷冻，尤其需要解决的另一大问题就是如何处理好手术和化疗之间的时间间隔。在这短短的时间间隔内，能否完成促排卵、取卵、冷冻的全部程序？
在苏榕等外科、肿瘤科专家看来，早期癌症患者最佳的化疗时机往往是术后一个月内，超过1个月化疗效果将大打折扣。“我们不主张患者为了冷冻卵子延后化疗，因为患者的生命始终是最根本的前提，她本人都治疗不好，冷冻卵子将变得毫无意义。”
那 么，一个月的窗口期够吗？“以现有的促排卵技术而言，一个月足够了，关键是把握好生殖医学科与肿瘤科、外科的衔接工作。”刘见桥表示，只要患者在手术时明 确提出相关要求，并提前完成B超、血液检查，发现卵巢功能无异状。目前的促排卵药物能够保证在注射10-14天后排出足够多的成熟卵子。“哪怕患者当时正 处于例假期，都能达到这样的效果，当然我们更建议在黄金期促排卵。”
卵子解冻后受孕成功率多大？
复苏率及受孕率约为75%也得看卵子质量
根 据美国冷冻卵子机构的数据，38岁女性冷冻卵子的解冻复苏率及之后的受孕率大致都为75%。也就是说，如果冷冻10颗卵子，那解冻后复苏的大概只有7颗， 能成功受精发育为胚胎的有5-6颗，为了保证受孕成功，通常会移植3-4个胚胎。这也是为什么做一次人工受精通常要存储10颗卵子。另外，解冻复苏率和受 孕率也受卵子自身质量的影响。
在刘见桥看来，这和具体的操作手法、操作规程有直接关系。以该院最近两年的卵子解冻后的试管婴儿操作为例， “去年一共完成6例，仅成功3例，其中有受孕女性身体方面的原因。”今年操作的9例40岁以下女性冷冻卵子解冻操作中，2例解冻后因个人原因培养成胚胎不 适宜植入宫腔，4例B超检出成功怀孕，2例已经有生化指标提示怀孕，1例因还没有达到验孕期，不确定是不是怀上。
除了成功率，对于使用促排 卵药物后的不良反应，也是人们普遍担忧的一个问题。刘见桥表示，在我国，由于癌症患者是明确的化疗损害生殖细胞人群，她们完全符合进行冷冻卵子的医学适应 症。“但对于普通人群，目前我国的法律法规还未放开限制。而在美国，苹果公司、谷歌等国际知名公司将企业支付女职工卵子冷冻相关费用，作为一项福利推 广。”
国内冷冻卵子过程最昂贵的是促排卵
杜红姿介绍，和国外冷冻卵子动辄数万美金不同，在国内进行冷冻卵子，费用最昂贵的部分是促排卵药物的使用和前期的完善检查，这个过程费用大约7000-8000元。
而 快速冷冻卵子，虽然试剂很昂贵，但这样的操作，无论针对单个卵子细胞还是20个以上的卵子细胞，每次收费都是1200元。反过来解冻收费则为800元，同 样不限个数。解冻后的胚胎植入宫腔操作需要1200元。至于将冷冻卵子放置在零下196℃的液氮罐内，每月收费110元，一年1320元。
卵子冰冻及受孕过程
第一步 取卵
目前的促排卵药物对人体的内分泌机制分析已经很透彻了，即便刚刚来过例假，也可以马上进行药物促排卵，从使用药物的10-12天开始，便可以使用微创技术进行取卵，一般取出数量为10个左右。
第二步 卵泡清洗和去除颗粒杂质
这样首先可以查看卵子的成熟程度，其次去除杂质后便于用来保护卵子的保护剂进入细胞。在快速脱水时，不至于损害到卵子细胞。
第三步 卵子玻璃化冷冻
分梯度由低到高使用对应浓度、渗透压的药剂进行脱水，全部脱水冷冻过程仅需5分钟时间。
第四步 液氮罐冷冻保存
将脱水卵子放置在零下196℃的液氮罐子里进行冷冻保存。原则上可以无限期保存，前提是温度一直处于零下196℃。
第五步 卵子解冻
当需要使用卵子时，从液化氮中取出卵子，分梯度使用药剂，按照由高到低使用对应浓度、渗透压的药剂进行复原，全部过程可以快速完成。
第六步 精子处理
从提取的丈夫一方精子中，使用显微观察，捕捉到形态最好，最具活力的一只“蝌蚪”予以逮捕。用针头吸入针管。
第七步 卵子单精子注射
将捕捉到的活跃精子，注射入卵子当中，完成体外人工辅助生殖操作。
第八步 受精卵及胚胎培养
完成受精后，在特定环境下进行胚胎培养3-5天，考虑到细胞分裂的时间、速度，一般在第三天时，最初的单一受精卵大约分裂为8个细胞。随后进入快速分裂期，细胞数呈集合级数增长。到了第5天时，已经发育成有2的N次方个细胞后，即为合格胚胎。
第九步 胚胎植入
选取合适胚胎，植入到女性宫腔内。15天后，进行验孕操作，判断是否成功怀上孩子。
